Актуальность исследования. Задача импортозамещения в здравоохранении, разработка нормативно-правовых актов в рамках ЕВРАЗЭС ставит вопросы гармонизации отечественных требований с международными, в том числе при стандартизации лекарственных средств. В связи с этим актуальна оценка качества отечественных рекомбинантных человеческих эритропоэтинов (рчЭПО) в соответствии с требованиями Европейской фармакопеи. Основной показатель качества препаратов рчЭПО - специфическую активность - в РФ определяют по влиянию препарата на стимуляцию эритропоэза, подсчитывая количество ретикулоцитов с помощью проточной цитометрии или световой микроскопии, последний способ подсчета не включен в Европейскую фармакопею. Адекватная оценка указанного показателя необходима при разработке национальных требований к контролю качества препаратов рчЭПО, гармонизированных с Европейской фармакопеей. Цель работы: сравнительная оценка точности метода определения специфической активности эритропоэ-тина при учете результатов с помощью проточной цитометрии и световой микроскопии для гармонизации проекта общей фармакопейной статьи с Европейской фармакопеей. Методы исследования. Специфическую активность эритропоэтина определяли in vivo на нормоцитеми-ческих мышах при учете результатов с помощью проточной цитометрии в соответствии с Европейской фармакопеей и световой микроскопии. Сравнивали два независимых ряда разведений стандартного образца эритропоэтина Европейской фармакопеи. Результаты. Результаты определения специфической активности эритропоэтинов с использованием двух способов подсчета различаются по смещению относительно опорного значения (аттестованного значения): при проточной цитометрии наблюдается смещение в пределах 1-8 %, при световой микроскопии - 4-31 %. При оценке промежуточной прецизионности установлено, что дисперсия результатов определения специфической активности эритропоэтинов, полученных при учете проточной цитометрией, в 2 раза меньше, чем при использовании световой иммерсионной микроскопии. Вывод. Определение специфической активности препаратов эритропоэтинов с использованием проточной цитометрии характеризуется высокой точностью и соответствует требованиям Европейской фармакопеи. Рассмотрена возможность использования световой микроскопии для учета результатов при отсутствии проточного цитометра, использование световой микроскопии требует повышения точности в целях гармонизации методики с требованиями Европейской фармакопеи.
Rationale. The task of import substitution in health care and the development of normative legal acts in the framework of the Eurasian Economic Community raises the questions of harmonization of national requirements with international ones, including the standardization of drugs. Thereby, the assessment of the quality of domestic recombinant human erythropoietin in accordance with European Pharmacopoeia requirements is very actual. The main indicator of drug quality is specific activity of drug (rhepo). In Russian Federation it is determined by the influence of the drug on erythropoiesis stimulation. This effect of erythropoietin is measured by counting the number of reticulocytes using the flow cytometry and light microscopy. The latter method of calculation is not included in European Pharmacopoeia. Adequate assessment of this indicator is required for the development of national requirements for quality control of drugs rhepo harmonized with European Pharmacopoeia. Purpose of the work. The study aimed the comparative evaluation of the accuracy of the specific erythropoietin activity determination method using the flow cytometry and light microscopy data to provide the harmonization of the draft General monograph with European Pharmacopoeia. Research methods. The erythropoietin specific activity was determined in vivo in normocythaemic mice using the flow cytometry in accordance with the European Pharmacopoeia and light microscopy. We have compared the effects of two independent dilution series of erythropoietin European Pharmacopoeia standard sample. Results. The results of specific erythropoietin activity determination obtained by two different methods of measurement differed in the offset from the reference value (certified value). In flow cytometry data, the offset varied between 1-8%, the results of light microscopy showed higher variability ranging from 4 to 31%. The estimation of intermediate precision showed twice lower dispersion of specific erythropoietin activity measurements obtained by flow cytometry in comparison with light immersion microscopy data. Conclusion. Specific erythropoietin drug activity determination with flow cytometry is characterized by high accuracy and meets the European Pharmacopoeia requirements. We have considered the possibility of light microscopy usage for the same task in the absence of a flow cytometer. The usage of light microscopy requires increasing its accuracy in order to harmonize the method with European Pharmacopoeia requirements.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.